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培养基配制的基本流程是怎样的?

时间:2017-12-25来源:http://www.zupeiwang.net/news/262.html

培养基灌装机是整个组培中必不可少的,我们在配制培养基时,不仅仅要做很多准备工作,还要确定其需要培养基配方,最后还要确定其培养基的用量,并且要确定其培养基的用量。那么,培养基配制的基本流程是怎样的?其培养基配的基本制程序如下:

培养基配制程序

植物组织培养

1. 将贮存的各种母液按顺序依次放好。

2. 将各种洁净的玻璃器皿如培养瓶、量筒、烧杯、吸管、玻璃棒、漏斗等,放在指定的位置。准备好蒸馏水或无离子水及瓶盖或封口膜、包纸、橡皮筋等。

3. 称取规定量的琼脂和蔗糖,将琼脂置于精钢锅或者电饭煲中,加水至培养基最终容积的3/4或1/2,随之加热使之溶解,注意防止煳锅底和溢出。琼脂必须完全溶化,以免造成浓度不均。

琼脂不能过多,不然会导致培养基太硬,含水太少,通气不良;反之,培养基太软,植物材料则难以固定。由于琼脂较难溶解,所以在制备培养基时,应首先加热溶解。

4. 按母液顺序,根据不同母液的浓缩倍数移取规定的量(关注组培圈微信号:zupeiquan,回复“1005”查看母液的配制方法和浓缩倍数),如配制1L MS培养基移取浓缩10倍的大量元素母液为100mL。母液加完后,再经过计算加入所需要的植物生长调节剂。

在加入母液或生长调节剂时,应事先检查这些药品是否已经变色或产生沉淀,若出现这些现象就停止使用。加完后一并倒入已溶化的琼脂中,并再加入蔗糖。

5. 加蒸馏水定容至培养基的最终容积。

6. pH值调整。培养基的pH值(酸碱度)直接影响培养物对离子的吸收,所以过酸或过碱都会影响植物的生长。此外,琼脂培养基的pH值还影响到其凝固程度,所以当培养基配制好以后,应随即进行pH值的调整(一般pH值为5.6-6.0)。

最好是用酸度计测试,即快又准,如无此设备也可以用精密pH试纸(应在干燥容器中保存,以免吸潮而失效)。若培养基偏酸就用1mol/L的氢氧化钠来调节,偏碱则用1mol/L的盐酸来调节。

经高压蒸汽灭菌后,由于某些成分的分解(如蔗糖)或氧化,使培养基的pH值会降低(一般会降低0.2左右)。有时玻璃皿质量较差,其中一部分物质溶解,也会影响酸度的变化,这些再调整培养基的pH值的时候都要考虑进去。

一般在比较成熟的情况下,会在培养基高压蒸汽灭菌前调高一定的pH值,以便适应灭菌后pH值下降的问题,具体调高多少可根据自身实验摸索。

7. 培养基的分装。琼脂约在40℃以下时凝固,因此配制好的培养基要趁热分装,分装时一般用烧杯、漏斗直接精选分注。若条件允许,用培养基灌装机来分注会更加方便(下期将会发布一篇自制简易灌装机的文章,敬请关注)。

分装时要掌握好分注量,多了即浪费又减小培养物的生长空间;少了又会因营养不足而影响生长,一般以占培养容器1/4 - 1/3左右为宜,培养基在培养容器中的厚度约为1.5cm。

分装时要注意不要将培养基沾到管壁上,以免引起污染。分装后立即塞上棉塞或者盖上瓶盖或封好封口膜,并在培养瓶上贴标签或用记号笔在瓶壁上作好标注,然后进行灭菌。

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